Adenovirus Rapid Tès-Nasal Sekresyon

Itilizasyon entansyon:

TWOus tès Asid Nikleyik Sars-CoV-2 aplike nan deteksyon kalitatif nan asid nikleyik nan COVID-19 nan swab nasopharyngenal, swabs òfelina ak sputum. Rezilta tès yo bay baz molekilè dyagnostik pou enfeksyon oswa pasyan sispèk, epi yo pa ta dwe itilize kòm kritè a sèl pou dyagnostik klinik.

Materyèl:

Pwosedi tès:

A. Preparasyon echantiyon

Ekstrè RNA se materyèl la kòmanse pou twous tès ASID Nikleyik sa yo.

Enpòtan: Chak pwosedi ekstraksyon nikleik dwe fèt ansanm ak yon sèl kontwòl pozitif (40 μL, dilye ak solisyon esteril / PBS vle volim) ak yon sèl kontwòl negatif (40 μL, dilye ak solisyon saline esteril / PBS vle volim).

Li rekòmande pou itilize twous ekstraksyon komèsyal sa yo: PureLinkTM Viral RNA / DNA Mini Kit (Envitwojèn); Viral RNA Mini twous (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA /RNA Kit (TIANGEN);

B. Reyaksyon Melanje konfigirasyon

1. Tout reyaktif ak echantiyon yo ta dwe deglase konplètman, melanje konplètman ak santrifujeur yon ti tan nan tanperati chanm (apeprè 18 a 25 ° C) anvan yo itilize.

2. Prepare volim ki nesesè yo nan Melanj reyaksyon an nan yon tib ki apwopriye polipropylene mikwo-òganis.

3. Pipette 25 μL nan Melanj la Reyaksyon nan chak obligatwa byen nan yon plak reyaksyon ki apwopriye 96-byen oswa yon tib reyaksyon optik ki apwopriye.

C. Modèl adisyon

1. Ajoute 5 μL nan ekstrè RNA soti nan echantiyon / kontwòl pozitif / Negatif. Volim total la se 30 μL.

2. Byen melanje echantiyon yo ak kontwòl ak Melanj la Reyaksyon pa tiyo moute ak desann / Vortex.

3. Fèmen plak reyaksyon 96-byen ak kouvèti ki apwopriye oswa fim adezif optik ak tib yo reyaksyon ak kouvèti ki apwopriye.

4. Santrifuge plak reyaksyon 96-byen nan yon santrifij ak yon rotor plak mikwo-òganis pou 30 segonn nan apeprè 2500rpm.

D. Pwogramasyon Enstriman an tan reyèl PCR

Pou enfòmasyon debaz konsènan konfigirasyon an ak pwogram nan enstriman yo an tan reyèl PCR, tanpri al gade nan manyèl la itilizatè nan enstriman an respektif. Asire a te optimisé pou sistèm nan ABI7500 PCR an tan reyèl. PCR a kouri fèt ak monte bisiklèt jan sa dekri nan tablo ki anba a.

Defini detektè fliyoresans yo

* Tanpri mete referans entèn fliyoresans entèn nan enstriman an nan "Okenn", pou egzanp: Pou enstriman seri ABI mete "Referans pasif" nan "Okenn".

E. Done analiz

Tanpri mete paramèt analiz yo ak analize done yo dapre enstriksyon yo fonksyone nan enstriman ki enpòtan yo.

Pran ABI 7500 kòm yon egzanp:

Baseline a ta dwe mete nan yon seri ki elimine fluoresans background nan yo te jwenn nan sik yo byen bonè nan anplifikasyon, men ki pa sipèpoze zòn nan kote anplifikasyon siyal monte pi wo a background nan (Kòmanse valè:3~10; Fini valè: 10-20). Papòt sik la (Ct) ta dwe nan baz faz eksponansyèl la. Klike sou "Analiz" pou jwenn rezilta analiz la otomatikman, epi li rezilta deteksyon an nan fenèt "Rapò" la.

Baj popilè: adenoviris rapid tès - nen sekresyon, Lachin, founisè, manifaktirè yo, faktori, en