SARS-CoV-2 Twous Tès Asid Nukleik

Itilizasyon entansyonèl:

Twous Tès Asid Nukleik SARS-CoV-2 aplike nan deteksyon kalitatif asid nikleyik COVID-19 nan prelèvman nasofarinj, prelèvman orofarinj ak krache. Rezilta tès yo bay baz dyagnostik molekilè pou enfeksyon oswa pasyan sispèk, epi yo pa ta dwe itilize kòm sèl kritè pou dyagnostik klinik.

Materyèl:

Pwosedi tès:

A. Preparasyon echantiyon

RNA ekstrè se materyèl demaraj pou twous Tès Asid Nukleik SARS-CoV-2.

Enpòtan: Chak pwosedi ekstraksyon asid nikleyik dwe fèt ansanm ak yon sèl kontwòl pozitif (40 μL, delye ak solisyon saline esteril / PBS nan volim vle) ak yon kontwòl negatif (40 μL, delye ak solisyon saline esteril / PBS nan volim vle).

Li rekòmande pou itilize twous ekstraksyon asid nikleyik komèsyal sa yo: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Viral RNA Mini kit (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA Kit (TIANGEN);

B. Reyaksyon Mix konfigirasyon

1. Tout reyaktif ak echantiyon yo ta dwe dekonjle nèt, melanje konplètman epi santrifuje yon ti tan nan tanperati chanm (apeprè ranje 18 a 25 degre) anvan ou itilize.

2. Prepare volim ki nesesè nan Melanj Reyaksyon an nan yon tib mikrosantrifij polypropylène gwosè apwopriye.

3. Pipete 25 µL Melanj Reyaksyon an nan chak pi ki nesesè nan yon plak reyaksyon 96-optik ki apwopriye oswa yon tib reyaksyon optik ki apwopriye.

C. Modèl adisyon

1. Ajoute 5 μL RNA extrait nan echantiyon/kontwòl pozitif/kontwòl negatif. Volim total la se 30 μL.

2. Byen melanje echantiyon yo ak kontwòl yo ak melanj Reyaksyon an nan pipet monte desann/Vòtex.

3. Fèmen 96-plak reyaksyon byen ak kouvèti ki apwopriye oswa fim adezif optik ak tib reyaksyon yo ak kouvèti ki apwopriye yo.

4. Santrifize plak reyaksyon 96-byen an nan yon santrifij ak yon rotor plak mikrotiter pou 30 segonn nan apeprè 2500rpm.

D. Pwogramasyon an tan reyèl PCR enstriman an

Pou enfòmasyon debaz konsènan konfigirasyon ak pwogramasyon diferan enstriman PCR an tan reyèl, tanpri al gade manyèl itilizatè a nan enstriman respektif la. Yo te optimize tès la pou sistèm PCR an tan reyèl ABI7500 la. Kouri PCR la fèt ak kondisyon monte bisiklèt jan sa dekri nan tablo ki anba a.

Defini detektè fluoresans yo

*Tanpri mete referans entèn fluoresans enstriman an nan "Okenn", pou egzanp: Pou enstriman seri ABI mete "Referans pasif" nan "Okenn".

E. Analiz done

Tanpri mete paramèt analiz yo epi analize done yo dapre enstriksyon yo fonksyone nan enstriman ki enpòtan yo.

Pran ABI 7500 kòm yon egzanp:

Liy debaz la ta dwe mete nan yon seri ki elimine fliyoresans background yo te jwenn nan premye sik anplifikasyon yo, men ki pa sipèpoze zòn kote siyal anplifikasyon yo monte pi wo pase background nan (Valè kòmanse: 3 ~ 10; Valè fen: {{2} }). Papòt Sik la (Ct) ta dwe nan baz faz eksponansyèl la. Klike "Analiz" pou jwenn rezilta analiz la otomatikman, epi li rezilta deteksyon an nan fenèt "Rapò".

Baj popilè: sars-cov-2 twous tès asid nikleyik, Lachin, Swèd, manifaktirè, faktori, esansyèl